Analisis Senyawa Hidrofilik Pada HPLC

Analisis fase terbalik merupakan bentuk yang paling populer pada pemisahan menggunakan HPLC. Dalam analisis makanan, banyak sampel yang hidrofilik sehingga dapat merusak kolom C18 standar. Berikut ini adalah perbandingan dari dua pilihan untuk meningkatkan analisis senyawa hidrofilik.

Menambahkan Ion Pairing Reagent ke Fase Gerak

Salah satu pilihan untuk meningkatkan waktu retensi sampel hidrofilik adalah dengan menggunakan ion pairing reagent dengan konsentrasi rendah sebagai bahan tambahan ke fase gerak.

Saat dikomplekskan menjadi molekul ion pasangan hidrofobik, analit dipertahankan pada kolom fase terbalik. Ion pairing reagent harus sesuai dengan target analit - sifat basa dipertahankan dengan alkana asam sulfonat dan asam yang kompleks dengan tetrabutilammonium klorida. Hal ini menghasilkan fase gerak yang lebih kompleks dan mengenal lebih jauh potensi impurities (pengotor).

Menggunakan Fase Diam Hidrofobik

Sebuah kolom C18 yang sangat kuat meningkatkan ikatan komponen sampel hidrofilik, tanpa perlu menambahkan ion pairing reagent ke fase gerak.

Kolom Enduro C18G berisi fase diam yang sangat hidrofobik dengan kandungan karbon sebesar 18%. Pengujian telah menunjukkan bahwa kolom ini dapat dijalankan untuk waktu yang lama dalam kondisi air murni tanpa mempengaruhi kinerja.

Contoh

Komponen hidrofilik pada biji kopi panggang dipisahkan secara efektif menggunakan kolom enduro C18G dengan 0,5% asam fosfat dalam air sebagai fase gerak . Kromatogram tersebut menunjukkan bentuk puncak yang simetris untuk semua komponen yang diuji (trigonelline, quinic acid, nicotinic acid dan citric acid).

Berikut hasil kromatogram untuk analisa trigonelline, quinic acid, nicotinic acid dan citric acid: